Универсальный набор для выделения и очистки нуклеиновых кислот (ДНК, РНК) "Агросорб НК"
Вашему вниманию набор растворов для выделения ДНК и РНК из биологических проб растительного и животного происхождения. Препараты нуклеиновых кислот, подготовленные с помощью данного набора. Подойдет для дальнейшего проведения обратной траскрипции, классической полимеразной цепной реакции, ПЦР в реальном времени, а также для других типов амплификации. Имеет широкое применение: от гербарного материала, пищевых продуктов, растительных проб до крови и сыворотки.
Набор растворов "Агросорб НК" аппробирован нами и нашими коллегами и очень хорошо себя зарекомендовал.
Набор «Агросорб НК» предназначен для выделения ДНК и РНК из проб растительного (семена, вегетативные органы) и животного (кровь, ткани, смывы со слизистых оболочек, моча и т.д.) с помощью твердофазного сорбентных метода.
Принцип метода
При выделении нуклеиновых кислот используется лизуючий реагент с гуанидинхлоридом. В присутствии лизирующего реагента ДНК сорбируется на силики-сорбенте, отмывается от белков и солей спиртовым раствором.
Состав набора:
- Лизирующий реагент - 60 мл
- Сорбент - 2 мл
- Солевой буфер - 300 мл
- Растворитель НК - 10 мл
Все компоненты набора готовы к использованию.
Каждый компонент набора можно приобрести отдельно.
Набор рассчитан на 100 выделений нуклеиновых кислот.
Срок годности - 1 год.
Украинский производитель. Доставка по Харькову (возможен самовывоз) и по Украине почтой.
Инструкция по выделению НК (ДНК, РНК) из биологического материала (Агросорб НК)
Содержание
|
1. Цель |
|
|
2. Принцип метода |
|
|
3. Оборудование, материалы, реактивы |
|
|
4. Приготовления и хранения растворов |
|
|
5. Процедура выполнения анализа |
|
|
6. Техника безопасности |
1. Цель - выделить ДНК из разного биологического материала (семян и вегетативных органов растений, микроорганизмов, образцов животного происхождения и т.д.).
2. Принцип метода - при выделении ДНК используется лизуючий реагент с гуанидинхлоридом для солюбилизации клеточного дебриса, денатурации клеточных нуклеаз. В присутствии лизирующего реагента ДНК сорбируется на силики-сорбенте, отмывается от белков и солей спиртовым раствором.
3. Оборудование, материалы, реактивы
3.1. Оборудование
- штатив для микропробирок;
- микропробирки (1,5 мл)
- дозаторы автоматические (от 10 до 1000 мкл);
- одноразовые наконечники для дозаторов;
- термостат для микропробирок;
- центрифуга высокоскоростная для микропробирок;
- вортекс;
- пинцет;
- шпатель;
- индивидуальные средства защиты персонала;
- ёмкость с дезинфицирующим раствором.
3.2. Реактивы
- тест-набор «Агросорб НК».
4. Приготовления и хранения растворов
Тест-набор сохраняется в течение 1 года при температуре 4 ° С.
5. Процедура выполнения анализа
5.1. Подготовить пробы к анализу (если требуется предварительная пробоподготовка). Достать набор реактивов из холодильника, прогреть до комнатной температуры.
5.2. В пробирку 1,5 мл внести 100 мкл пробы, добавить 400 мкл лизирующего раствора, тщательно перемешать.
5.3. Перенести в термостат на 5-7 мин. при температуре 65 ° С. Если выделение проводится с твердого сухого материала - термостатуваты 30-40 мин.
5.4. Центрифугировать 30 сек. при 5 тыс. об. / мин. Супернатант перенести в новую пробирку (примерно 200 мкл).
5.5. Перемешать Сорбент на вортексе.
5.6. Добавить 20 мкл сорбента в каждую пробирку.
5.7. Пробирки перенести на вортекс и перемешивать 10 мин. (7-10 об. / Мин.).
5.8. Центрифугировать 30 сек. при 5 тыс. об. / мин.
5.9. Осторожно удалить супернатант. К осадку добавить 200 мкл лизирующего раствора, тщательно перемешать на вортексе до полного гомогенного состояния.
5.10. Добавить в пробирку 1 мл солевого буфера. Перемешать перелистыванием 5-10 раз.
5.11. Центрифугировать 30 сек. при 5 тыс. об. / мин. Осторожно слить супернатант.
5.12. Добавить в пробирку 1 мл солевого буфера, перемешать на вортексе, центрифугировать 30 сек. при 5 тыс. об. / мин., слить супернатант.
5.13. Повторить пункт 5.12.
5.14. Подсушить осадок на термостате 4-5 мин. при температуре 65 ° С. Крышки пробирок при этом должны быть открытыми.
5.15. Добавить 50-100 мкл Растворителя НК. Перемешать на вортексе до получения гомогенной суспензии.
5.16. Перенести в термостат на 4-5 мин. при температуре 65 ° С.
5.17. Еще раз перемешать содержимое пробирки на вортексе. Центрифугировать 1 мин. при 14 тыс. об. / мин.
5.18. Перенести супернатант с ДНК в чистую пробирку. Хранить при 4 ° С в течение месяца.
5.19. Для длительного хранения перенести в холодильник при минус 20 ° С в течение года.
6. Техника безопасности
6.1. При работе с тест-набором обязательно использовать средства индивидуальной защиты (одежда, обувь, перчатки), поскольку в состав лизуючий раствор входит сильный денатурированной агент гуанидинхлорид.
6.2. Для предупреждения контаминации следует менять наконечники при внесении другого реактива.
